کاربرد بطری سرم

کاربرد بطری سرم

بطری سرم از شیشه بوروسیلیکات کم استخراج ساخته شده است و بطری شفاف بی رنگ الزامات USP Type I و ASTM E 438 Type I استاندارد کلاس A را برآورده می کند. می توان آن را در دمای 121 درجه به مدت 20 دقیقه اتوکلاو کرد و می توان آن را به 125 میلی لیتر تقسیم کرد. 250 میلی لیتر، 500 میلی لیتر، 1 لیتر، 2 لیتر با توجه به حجم.

بطری سرم ظرفی برای نگهداری سرم است که به طور کلی از مواد PET با فرآیند دمش کششی تزریقی ساخته می شود. محیط، ماده مغذی مورد نیاز برای رشد سلول است. با توجه به منبع آن، به محیط مصنوعی و محیط طبیعی تقسیم می شود که هر دو را می توان در بطری های سرم نگهداری کرد.

بطری سرم

محیط طبیعی:

متداول ترین محیط طبیعی مورد استفاده، سرم، اساساً سرم گوساله است. سرم حاوی انواع فاکتورهای رشد سلولی، عوامل تقویت کننده چسبندگی و مواد چند فعال آنهاست. در ترکیب با محیط مصنوعی، سلول ها می توانند تکثیر شوند و به آرامی رشد کنند. سرم باید در بطری های سرم مخصوص در دمای -5 درجه تا -20 درجه نگهداری شود.

محیط مصنوعی:

محیط مصنوعی دقیقاً بر اساس نوع و مقدار مواد مورد نیاز سلول ها فرموله می شود. انواع و مولفه های شناخته شده زیادی وجود دارد که کنترل شرایط تجربی را تسهیل می کند. حاوی کربوهیدرات ها، اسیدهای آمینه، لیپیدها، نمک های معدنی، ویتامین ها، عناصر کمیاب و فاکتورهای رشد سلولی است. با این حال، در مقایسه با محیط طبیعی، برخی از اجزای طبیعی ناشناخته را نمی توان با اجزای شیمیایی شناخته شده جایگزین کرد. بنابراین، محیط مصنوعی پایه مورد استفاده در کشت سلولی نیز باید مقدار مشخصی از اجزای محیط طبیعی را اضافه کند تا بر کشت مصنوعی غلبه کند. پایه ناکافی، رایج ترین روش افزودن سرم گوساله است.

شکل بطری سرم مربع است، به راحتی قابل درک است، در برابر اکثر خوردگی اسیدی و قلیایی مقاوم است، دمای شکنندگی آن -70 درجه است، و همچنان در -30 درجه چقرمگی خاصی دارد. این ظرف بسته بندی خوبی است، چه محیط طبیعی باشد و چه کشت مصنوعی. را می توان در بطری های سرم نگهداری کرد.

برای جداسازی، کشت و شناسایی سلول‌های پیش‌ساز اندوتلیال خون بند ناف انسان و ایجاد داربست‌های عروقی بدون سلول به روش بهبودیافته انجماد و ذوب.

برای بررسی امکان سنجی و ارزش کاربرد بالینی سلول های پیش ساز اندوتلیال جدا شده و کشت شده از خون بند ناف انسان.

روش‌ها: خون بند ناف جنین‌های تحت عمل سزارین تمام‌ترم در بخش زنان و زایمان، اولین بیمارستان وابسته به کالج پزشکی Bengbu جمع‌آوری شد و در یک بطری سرم حاوی 50U/ml هپارین قرار داده شد. در شرایط آسپتیک، در یک جعبه یخ 4 درجه نگهداری و به سلول‌ها منتقل شد. در اتاق کشت، سلول‌های تک هسته‌ای خون بند ناف با سانتریفیوژ گرادیان چگالی به‌دست آمدند. سلول‌های تک هسته‌ای به‌دست‌آمده به دو قسمت تقسیم شدند و محیط‌های M199 سرم جنین گوساله (FCS-M199) و سرم اتولوگ M199 (AS-M199) اضافه شدند. و آنها را در ظروف کشت با و بدون فیبرونکتین انسانی (HFN) (به ترتیب به عنوان: F(0)، F(1)، A(0)، A(1)) بذر دادند. القا، تمایز و بسط در شرایط آزمایشگاهی انجام شد.

تغییرات مورفولوژیکی سلول های چسبنده در طول کل فرآیند القاء و تمایز مشاهده شد و آنها از زوایای مختلف همراه با تکنیک های مرتبط مانند ایمونوهیستوشیمی، ایمونوفلورسانس و فلوسیتومتری شناسایی شدند.

یافته‌ها: پس از 12 روز کشت، سلول‌های تک هسته‌ای خون بند ناف شروع به چسبیدن کردند. بعد از 3d، شکل دوک شروع به نمایان شدن کرد و سپس تعداد سلول های چسبنده به تدریج افزایش یافت و به تدریج دوکی شکل شد. هنگامی که تا یک هفته کشت می شود، یک کلنی معمولی با سلول های دوکی در اطراف و سلول های گرد در مرکز تشکیل می شود. هنگامی که سلول ها به مدت 14 روز کشت داده شدند، خوشه های سلولی به هم پیوسته به تدریج به هم متصل شدند و ساختار شبکه مانندی را تشکیل دادند. در همان زمان، با افزایش مداوم زمان کشت، سلول‌های دوک بلند نیز به تدریج شروع به کوتاه شدن کردند و یک تغییر معمولی شبیه سنگ‌فرش نشان دادند.

سلول‌های چسبنده به مدت یک هفته کشت داده شدند و مشاهده شد که تعداد سلول‌های محیط با فیبرونکتین انسانی به‌طور معنی‌داری بیشتر از بدون فیبرونکتین انسانی بود و تغییر معنی‌داری در تعداد سلول‌ها در دو محیط مختلف مشاهده نشد.