اغلب مشکلاتی از یک نوع یا دیگری در فرآیند کشت سلولی وجود دارد. کشت سلولی را دست کم نگیرید، اما حاوی سوالات دانشگاهی است. با برقراری ارتباط با کاربران، مشکلات زیادی را پیدا خواهید کرد که می توان از آنها جلوگیری کرد. موارد زیر در فرآیند کشت سلولی رایج است. علت ناهنجاری را تجزیه و تحلیل کنید.
ظرف کشت میکروب
1. سلول های کشت شده به دیواره نمی چسبند
دلیل احتمالی
1. هضم بیش از حد تریپسین;
2. آلودگی مایکوپلاسما;
3. مقدار pH محیط خیلی قلیایی است (تجزیه NaHCO3).
4. پیری سلولی;
5. غلظت اولیه سلول های تلقیح شده خیلی کم یا خیلی زیاد است.
راه حل
1. زمان هضم تریپسین را کوتاه کنید یا غلظت تریپسین را کاهش دهید.
2. کشت را جدا کرده و مایکوپلاسما را تشخیص دهید. پایه یا دستگاه جوجه کشی را تمیز کنید. اگر آلودگی به مایکوپلاسما یافت شد، کشت را دور بریزید.
3. از محلول اسید استیک استریل برای تنظیم pH یا پر کردن با CO2 استریل استفاده کنید.
4. سلول های حفاظتی جدید را فعال کنید.
5. غلظت بهینه سلول تلقیح شده را تنظیم کنید.
2. خوشه بندی سلول های معلق
دلیل احتمالی
1. محیط کشت حاوی یون های کلسیم و منیزیم است.
2. آلودگی مایکوپلاسما;
3. هضم بیش از حد توسط پروتئاز باعث لیز سلولی می شود.
4. آلودگی DNA.
راه حل
1. سلول ها را با محلول نمک متعادل بدون کلسیم و منیزیم بشویید و به آرامی باد کرده و بمکید.
2. سلول ها یک سوسپانسیون تک سلولی به دست می آورند.
3. کشت را جدا کنید و مایکوپلاسما را شناسایی کنید.
4. درمان DNasel سلول ها.
3. سلول های کشت شده به کندی رشد می کنند
دلیل احتمالی
1. به دلیل جایگزینی محیط کشت یا سرم مختلف.
2. برخی از اجزای لازم برای رشد سلولی در محیط کشت، مانند گلوتامین یا فاکتورهای رشد، کاهش یافته یا فاقد آن هستند یا از بین رفته اند.
3. مقدار کمی آلودگی باکتریایی یا قارچی در کشت وجود دارد.
4. ذخیره سازی نامناسب معرف ها.
5. غلظت اولیه سلول های تلقیح شده خیلی کم است.
6. سلول ها پیر شده اند.
7. آلودگی به مایکوپلاسما.
راه حل
1. ترکیب محیط جدید و محیط اصلی را مقایسه کنید، سرم جدید و سرم قدیمی را برای حمایت از آزمایشات رشد سلولی مقایسه کنید و اجازه دهید سلول ها به تدریج با محیط جدید سازگار شوند.
2. به محیط کشت تازه آماده شده تغییر دهید یا گلوتامین و فاکتورهای رشد را اضافه کنید.
3. از محیط کشت عاری از آنتی بیوتیک برای کشت استفاده کنید، در صورت مشاهده آلوده بودن، کشت را دور بریزید.
4. سرم باید در درجه -10 تا {2}} ذخیره شود. محیط کشت باید در 2-8 درجه در تاریکی نگهداری شود. محیط کشت کامل حاوی سرم باید در درجه 2-8 نگهداری شود و باید ظرف مدت 1 هفته مصرف شود.
5. افزایش غلظت اولیه سلول های تلقیح شده.
6. تغییر به یک سلول حفاظتی جدید.
7. کشت را جدا کرده و مایکوپلاسما را تشخیص دهید. پایه و دستگاه جوجه کشی را تمیز کنید. در صورت مشاهده آلودگی به مایکوپلاسما، کشت را دور بریزید.
چهارم، سلول های کشت شده رشد ضعیفی دارند
دلیل احتمالی
الف- وضعیت خود سلول
1. تعداد راه های سلولی زیاد است و سلول ها در حال پیر شدن هستند.
2. مقدار تلقیح سلولی: مقدار تلقیح بسیار کم، رشد سلولی کند.
3. عبور سلول ها خیلی دیر است: مسمومیت سلولی که بر رشد سلول ها پس از عبور تأثیر می گذارد.
4. زمان هضم تریپسین خیلی طولانی یا خیلی کوتاه است: اگر زمان خیلی طولانی باشد، سلول ها می میرند. اگر زمان خیلی کوتاه باشد، سلول ها به طور کامل به خوشه ها جدا نمی شوند و سلول ها می میرند.
5. انجماد و بازیابی سلول ها: انجماد آهسته و لیز فوری.
ب- آلودگی
1. آلودگی مایکوپلاسما;
2. آلودگی کپک.
C، محیط کشت یا سرم
1. بدون اعتبار سنجی قبل از جایگزینی سرم یا متوسط.
2. آیا رسانه انتخاب شده مناسب است یا خیر.
3. آیا آماده سازی محیط مناسب است یا خیر.
4. اینکه آیا آماده سازی محیط دقیق است یا خیر.
د. برای پرورش محیط زیست
1. آیا عرضه CO2 طبیعی است؟
2. دمای دستگاه جوجه کشی یا شیکر به درستی کنترل می شود.
راه حل
با توجه به چهار دلیل احتمالی بالا، راه حل های هدفمند ایجاد کنید
1. به وضعیت سلول ها توجه کنید: مانند تعداد دفعات، میزان تلقیح و غیره.
2. اجتناب از آلودگی (استفاده از سرم معمولی، قانونی و قابل ردیابی).
3. از سرم یا محیط مناسب، ترجیحا تایید شده استفاده کنید.
4. به محیط آزمایشگاه توجه کنید.
علل احتمالی مرگ سلولی در کشت
1. هیچ CO2 در انکوباتور وجود ندارد.
2. درجه حرارت در انکوباتور بیش از حد نوسان می کند.
3. سلول ها در طول انجماد یا بازیابی آسیب می بینند.
4. فشار اسمزی محیط کشت نادرست است.
5. تجمع متابولیت های سمی در محیط کشت.
راه حل
1. تشخیص CO2 در انکوباتور.
2. دما را در انکوباتور بررسی کنید.
3. یک گونه سلولی جدید حفظ کنید.
4. تشخیص فشار اسمزی محیط کشت.
5. تبدیل به محیط کشت تازه.