همانطور که همه ما می دانیم، انواع سلول های کشت شده در آزمایشگاه را می توان تقریبا به دو نوع تقسیم کرد: سلول های چسبنده و سلول های معلق، و تنها چند نوع سلول در هر دو حالت وجود دارد.
سلولهای معلق به نوعی از سلولها اطلاق میشود که میتوانند در حالت معلق در محیطی بدون تکیه بر تکیهگاههایی مانند لنفوسیتها و بیشتر سلولهای مشتق از سیستم خونی رشد کنند. (مانند سلول های لوسمی موش WEHI-3، سلول های لوسمی انسانی K-562، HL-60). در صنعت، سلول های چسبنده بیشتر و بیشتر اهلی شده و در حالت تعلیق کامل کشت می شوند. در حال حاضر سلولهای SP2/0، NS0، CHO، BHK و HEK293 عمدتاً در صنعت استفاده میشوند و عمدتاً برای تولید پروتئین نوترکیب استفاده میشوند. سلول های عبوری که معمولاً در محصولات بیولوژیکی دامپزشکی استفاده می شوند، عمدتاً شامل سلول های BHK21 هستند که در سوسپانسیون کامل، سلول های MDCK کشت می شوند. و سلول های Vero، سلول های PK، سلول های ST، سلول های Marc145 و ... با کمک کشت سوسپانسیون میکروحامل، هر سلول ویژگی های متفاوتی دارد.
سلول های معلق
سلول های تعلیق "thp{0}}" 200x
به طور کلی، سلولهای سوسپانسیون راحتتر از سلولهای چسبنده هستند زیرا برای عبور سلولهای سوسپانسیون نیازی به تریپسینیزاسیون نیست. اما این بدان معنا نیست که رشد سلولهای معلق آسانتر از سلولهای چسبنده است. برای تازه کارها، چالش برانگیزتر است. همیشه مشکلات مختلفی وجود دارد: به عنوان مثال، چرا سلول های مرده و تمایز سلولی همیشه ظاهر می شوند. توافق شده است که عبور آسان است، اما نتیجه تمایز خواهد بود. مشکلات پس از انجماد و بازیابی دوباره ظاهر می شوند!
در مرحله بعد، اجازه دهید در مورد چند نکته کلیدی در مورد کشت سلول های معلق بحث کنیم
نکته 1: صبر کافی است، بسیار لازم است
بسیاری از سلولهای تعلیق زمانی که تازه از انجماد بازیابی میشوند، زنده ماندن نسبتاً ضعیفی دارند. در این زمان باید آنقدر صبور باشیم که منتظر بمانیم تا سلول ها ترمیم خود را کامل کرده و وارد فاز رشد لگاریتمی شوند. برای مثال، THP-1 (لوسمی مونوسیتیک انسانی) اغلب به 7-10 روز دوره نقاهت از ذوب تا تکثیر طبیعی نیاز دارد. Jurkat، کلون E6-1 (سلولهای لوسمی لنفوسیتی T انسانی) نیز به 5-7 روز پس از بهبودی نیاز دارند. به حالت قبل از انجماد برگردید. تازه کارها ممکن است در این دوره آموزش را رها کنند، پس لطفا صبورتر باشید! پرورش چنین سلول هایی نیز فرآیند پرورش صبر است!
نکته 2: چگالی تلقیح را بگیرید
به طور کلی، تراکم سلول های معلق نباید کمتر از 500،{1}}/ML باشد. بسیاری از سلول های تعلیق وابسته به تراکم هستند و عدم تکثیر ناشی از چگالی کم نیز یکی از مشکلات رایج برای تازه کارها است. البته تعداد بسیار کمی از سلول ها وجود دارند که وضعیت آنها با بالا بودن تراکم بدتر می شود، مانند W6/32 (سلول های هیبریدومی سلول B موش). بنابراین، جستجوی اطلاعات مرتبط برای درک ویژگی های سلول ها قبل از کشت سلول های ناشناخته بسیار مهم است. فقط با شناخت خود و دشمن می توانید در همه نبردها پیروز شوید!
فرکانس جایگزینی متوسط نباید به "واضح" محدود شود. سلول ها موجودات زنده هستند. در طول یک چرخه کشت مداوم، مواد مغذی خاصی مانند محیط مکمل و گلوکز را می توان چندین بار بسته به وضعیت رشد سلول ها اضافه کرد تا وضعیت رشد خوب سلول ها حفظ شود. . در طی فرآیند کشت سوسپانسیون، با تکثیر سلولها، مصرف مواد مغذی در محیط اصلی و افزایش متابولیتها، قابلیت زندهمانی سلولها کاهش مییابد و تکمیل به موقع مواد مغذی، سلولها را در محیط زندگی نسبتاً خوبی قرار میدهد. من در اینجا وارد جزئیات نمی شوم و از سانتریفیوژ مکرر و جایگزینی مایع خودداری کنید.
بیایید در مورد روش جایگزینی مایع صحبت کنیم:
①روش تبادل مایع کامل گریز از مرکز
یعنی تمام محیط قدیمی را با سانتریفیوژ (800-1000rpm, 5min) بردارید و با محیط تازه جایگزین کنید. این روش برای جایگزینی متوسط سلولهای تعلیق "جامد پوستی" (مانند K562) یا شرایط فعلی که سلولها در شرایط خوبی هستند و تراکم بالا است و در نتیجه مصرف زیاد محیط ایجاد میشود، مناسب است. مزیت این روش این است که محیط به طور کامل تغییر میکند و میتوان مقداری بقایای سلولی را حذف کرد، اما باعث آسیب مکانیکی مشخصی به سلولها نیز میشود.
②روش نیمه تبادل گریز از مرکز
یعنی با سانتریفیوژ کردن (800-1000rpm, 5min) 50 درصد سوسپانسیون سلولی، 50 درصد حجم محیط تازه را جایگزین کنید. این روش برای مقایسه سلولهای دشوار کشت «ریا» (مانند thp-1) یا شرایطی که چگالی کم است اما در حالت تنظیم باید زبالههای بیشتری حذف شوند، مناسب است.
③ روش تبادل مایع ته نشینی
یعنی به جای استفاده از سانتریفیوژ، از روش ته نشینی طبیعی توسط گرانش برای جداسازی محیط از سلول ها استفاده می شود تا جایگزین تمام یا بخشی از محیط تازه شود. با این حال، محدودیتهایی در کاربرد دارد - فقط برای سلولهایی مناسب است که میتوانند خوشههای سلولی با اندازه خاصی تشکیل دهند (در غیر این صورت نمیتوانند به طور طبیعی ته نشین شوند و فقط میتوانند با سرعت کم سانتریفیوژ شوند)، بهویژه زمانی که با سلولهایی که برای تکثیر به تجمع سلولی متکی هستند سر و کار داریم. ، مانند NK-92، NK- 92 MI، Jurkat. این روش می تواند آسیب مکانیکی ناشی از فرآیند سانتریفیوژ را در طی فرآیند تبادل مایع به حداقل برساند، در حالی که توده سلولی انباشته را حفظ می کند، و حذف بقایای سلولی نسبتاً کامل است.
پس از تسلط بر نکات فوق، به علاوه یک بذر سلولی خوب، این نزدیکی است که سلول های تعلیق "زیبا" رشد کنند!
صفحه کشت سلولی
صفحه کشت سلولی U شکل Yongyue Medical بیشتر برای کشت سلول های سوسپانسیون، با استفاده از پلی استایرن درجه پزشکی (PS)، تولید شده در یک کارگاه تصفیه سطح 100، استریل شده با تابش، بدون DNase، RNase و پیروژن استفاده می شود. -رایگان، ایمنی و حفاظت از محیط زیست.
صفحات کشت سلولی در مشخصات مختلف برای رفع نیازهای کشت های مختلف باکتری موجود است. انواع محصول به 6-خوب، 12-خوب، 24-خوب، 48-خوب، 96-خوب، و 384-خوب، از تقسیم میشوند. که 96-چاه به پایین تخت، پایین U، پایین V-پایین تقسیم می شود. صفحات کشت U شکل بیشتر برای کشت سلول های سوسپانسیون استفاده می شود. صفحات کشت V شکل بیشتر برای آزمایش هماگلوتیناسیون ایمونولوژیک استفاده می شود.