تشخیص PCR

تشخیص PCR

واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) از یک قطعه DNA به عنوان الگو استفاده می کند و با مشارکت DNA پلیمراز و سوبسترای نوکلئوتیدی، DNA به مقدار کافی برای تجزیه و تحلیل ساختاری و عملکردی تکثیر می شود. روش تشخیص PCR اهمیت فوق العاده مهمی در تشخیص سریع بالینی بیماری های عفونی باکتریایی دارد.

اصل PCR برای تکثیر یک قطعه DNA واقع بین دو توالی شناخته شده، مشابه فرآیند همانندسازی DNA طبیعی استفاده می شود. مولکول DNA که باید تقویت شود به عنوان یک الگو استفاده می شود و یک جفت قطعات الیگونوکلئوتیدی مکمل انتهای 5' end و 3' انتهای الگو به عنوان آغازگر استفاده می شود. تحت عمل DNA پلیمراز، طبق مکانیسم تکثیر نیمه رزرو شده از الگو پیروی می کند. گسترش زنجیره تا پایان سنتز DNA جدید، این فرآیند را تکرار کنید، قطعه DNA هدف را می توان تقویت کرد.

(PCR) روشی برای سنتز آنزیمی قطعات DNA خاص در شرایط آزمایشگاهی است. این شامل چندین مرحله دناتوره شدن در دمای بالا، بازپخت در دمای پایین و گسترش دمای مناسب است. ویژگی هایی مانند حساسیت بالا، کارکرد آسان و صرفه جویی در زمان. می توان از آن نه تنها در تحقیقات پایه مانند جداسازی ژن، شبیه سازی و تجزیه و تحلیل توالی اسید نوکلئیک، بلکه در تشخیص بیماری ها یا هر مکانی که DNA و RNA وجود دارد استفاده کرد. واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، به اختصار PCR) همچنین به عنوان شبیه‌سازی مولکولی بدون سلول یا توالی DNA خاص در فناوری تقویت آنزیمی با هدایت پرایمر در شرایط آزمایشگاهی شناخته می‌شود.

همانندسازی نیمه ذخیره شده DNA یک راه مهم برای تکامل و عبور بیولوژیکی است. DNA دو رشته ای را می توان تحت تأثیر آنزیم های مختلف دناتوره کرد و به یک رشته تبدیل کرد. با مشارکت DNA پلیمراز و یک پروموتر، DNA دو رشته ای را می توان به همان دو مولکول مطابق با اصل جفت شدن بازهای مکمل تکثیر کرد. در آزمایش‌ها، مشخص شد که DNA را می‌توان در دماهای بالا دناتوره و ذوب کرد و با کاهش دما دوباره به رشته‌های دوتایی تبدیل شد. بنابراین، با کنترل دناتوره شدن و تغییر طبیعت DNA از طریق تغییرات دما و طراحی پرایمرها به عنوان پروموتر، افزودن DNA پلیمراز و dNTPs می تواند همانندسازی آزمایشگاهی ژن های خاص را تکمیل کند.

نکته ساده استفاده از تجهیزات ویژه، استفاده از dNTPS، Mg2+، پرایمرهای اختصاصی، DNA پلیمراز و سیستم بافر، اضافه کردن الگو که نمونه DNA برای تقویت آزمایشگاهی است و انجام الکتروفورز است. اگر بتوان آن را تقویت کرد و اندازه محصول تقویت شده با باند هدف مطابقت داشت، به این معنی است که پرایمر و قالب خاص هستند و شاخص تشخیص مثبت است.

روش ها و مراحل تشخیص اسید نوکلئیک PCR

آزمایش اسید نوکلئیک به پنج مرحله نیاز دارد: نمونه برداری، نگهداری نمونه، نگهداری، استخراج اسید نوکلئیک و آزمایش کامپیوتری.

تشخیص اسید نوکلئیک

اولین قدم جمع آوری ترشحات انسان و پاک کردن حفره بینی یا دیواره پشتی حلق و لوزه های حلقی دو طرفه با آزمایش بینی یا آزمایش حلق است.

در مرحله دوم، کادر پزشکی نمونه را نگه داشتند، سر قطعه آزمایش را در محلول نگهدارنده سلول فرو بردند و بلافاصله پس از شکستن دم، درپوش لوله را پیچ کردند.

در قسمت سوم، نمونه را در کیسه ای دربسته قرار داده، نگه دارید و به موقع برای بررسی ارسال کنید.

مرحله چهارم ارسال نمونه به آزمایشگاه برای استخراج اسید نوکلئیک است.

در مرحله پنجم عصاره تحت یک واکنش تقویتی PCR فلورسنت قرار می گیرد.

همچنین به برخی مواد مصرفی و ابزار نیاز دارد

ابزار PCR، لوله PCR، نوک پیپت، صفحه چاه عمیق، مخزن و معرف اضافه شده است