محیط کشت سلولی باید حاوی مواد مغذی کافی برای تامین مواد و انرژی مورد نیاز برای واکنش های بیوشیمیایی مانند سنتز سلولی جدید و متابولیسم سلولی باشد. اجزای اصلی محیط کشت سلولی آب، اسیدهای آمینه، ویتامین ها، کربوهیدرات ها، نمک های معدنی و سایر مواد مغذی کمکی هستند. بنابراین باید در آزمایشات روزانه به روش استریل کردن محیط کشت سلولی و احتیاطات مربوطه توجه کنیم.
کشت سلولی
1. روش های عقیم سازی و اقدامات احتیاطی برای محیط های کشت سلولی مختلف
روش های عقیم سازی محیط کشت سلولی به استریلیزاسیون اتوکلاو و استریلیزاسیون فیلتراسیون غشایی تقسیم می شود. محیط های کشت مختلف ممکن است به دلیل داشتن مواد مغذی متفاوت، روش های عقیم سازی متفاوتی داشته باشند.
اتوکلاو
برخی از محیط ها مانند MEM را می توان اتوکلاو کرد، این محیط ها عموماً حاوی ال-گلوتامین و بی کربنات سدیم نیستند و عموماً پس از اتوکلاو شدن محیط اضافه می شوند. علاوه بر این، گلوتامات با فشار بالا (مانند L-alanyl-L-glutamine) می تواند به جای L-گلوتامین استفاده شود. محیط قابل اتوکلاو کاملاً با حداقل از دست دادن مواد مغذی در دمای 121 درجه، psi 15 و 15 دقیقه، بدون افزایش زمان استریلسازی، استریل میشود.
اکثر محیط های کشت سلولی برای اتوکلاو مناسب نیستند. از آنجایی که محیط کشت اغلب حاوی ویتامین ها، پروتئین ها، پلی پپتیدها، فاکتورهای رشد و سایر مواد است، این مواد در معرض دمای بالا یا پرتو قرار گرفتن در معرض دناتوره شدن یا از دست دادن عملکرد هستند، بنابراین مایعات ذکر شده در بالا بیشتر فیلتر و استریل می شوند تا باکتری ها حذف شوند. غشاهای فیلتر زیادی برای فیلتراسیون و استریلیزاسیون موجود است و مواد آنها بیشتر PES، نایلون، پلی کربنات، استات سلولز، نیتروسلولز، PTFE، سرامیک و غیره است. در حال حاضر استریلیزاسیون فیلتراسیون غشایی یک روش معمول و راحت است. غشاهای فیلتر با اندازه منافذ 0.2 میکرومتر اغلب استفاده میشوند و برخی از اندازه منافذ 0}.1 میکرومتر استفاده میکنند. در مقایسه با فیلتراسیون فشار بالا، غشاها طول عمر بیشتری دارند و گرانتر هستند، اما برای مواد مغذی موجود در محیط کشت سلولی تخریب کمتری دارند.
2. اقدامات احتیاطی در طول نگهداری محیط های کشت سلولی مختلف
به طور کلی، محیط کشت سلولی مایع نباید در درجه -20 منجمد شود، زیرا ممکن است مواد مغذی در حین ذوب رسوب کنند که بر اثر کشت تأثیر می گذارد. در شرایط عادی باید در 2 تا 8 درجه دور از نور نگهداری شود. قبل از مصرف آن را از یخچال خارج کرده و در دمای محیط قرار دهید تا به حالت تعادل درآید. محیط مایع معمولی 6 تا 12 ماه اعتبار دارد. سعی کنید از نگهداری طولانی مدت محیط کشت سلولی مایع خودداری کنید. گلوتامین موجود در آن با افزایش زمان نگهداری به آرامی تجزیه می شود. اگر رشد سلولی خوب نیست، میتوانید محتوای گلوتامین را در محیط آزمایش کنید تا تعیین کنید که آیا گلوتامین اضافه کنید یا خیر. . محیط کشت مایع سلولی موجود در بازار دارای تاریخ انقضای خاصی است. پس از استفاده از محیط کشت سلولی پودر خشک برای تهیه مایع، باید در دمای پایین (2 تا 8 درجه) نیز نگهداری شود. علاوه بر تجزیه آسان گلوتامین در محیط، سایر اجزای محیط نیز ممکن است با افزایش دما تجزیه یا رسوب کنند.